Routinelabor und Forschungseinheit für Molekulare Erregerdiagnostik

Nationales Referenzlabor für Hepatitis A, B, C
QCMD-Referenzlabor für Hepatitis B, C

Birgit D. A. Michelin – Harald H. Kessler (Leiter) – Evelyn Stelzl

Abstract

Das Labor ist Teil des Instituts für Hygiene und sowohl für Routine als auch für Forschung ISO 9001:2000-zertifiziert. Methodische Schwerpunkte umfassen automatisierte DNA-/RNA-Extraktion, Real-time PCR und Sequenzierung. Dafür stehen modernste Geräte zur Verfügung. Neben der Routinediagnostik, die jährlich über 500 quantitative HBV DNA-Bestimmungen, HBV-Resistenzgenbestimmungen und HBV-Subtypisierungen und über 3000 quantitative HCV RNA-Bestimmungen und HCV-Genotypisierungen umfasst, werden zahlreiche wissenschaftliche Fragestellungen bearbeitet.

Kurzdarstellung der wesentlichen Forschungsvorhaben

Ein derzeit in Bearbeitung stehendes Forschungsvorhaben beschäftigt sich mit der Bestimmung des Geno- und Subtyps des Hepatitis C Virus (HCV), die besonders wichtig im Hinblick auf epidemiologische Studien, anti-virale HCV Therapie und Fragestellungen zur Pathogenität und zur Impfstoffentwicklung erscheint:
Derzeit kommerziell erhältliche Assays verwenden zur Genotypisierung die 5’ nicht kodierende Region (5’UTR). Die Diversität zwischen den verschiedenen Geno- und Subtypen ist in diesem Genomabschnitt aber gering. Aus diesem Grund ist die Bestimmung des Subtyps nicht immer möglich. Der Goldstandard für die Bestimmung des HCV Geno- bzw. Subtyps ist die reverse Transkription und Amplifikation mit anschließender Sequenzierung einer phylogenetisch informativen kodierenden Region (zum Beispiel NS5B oder die strukturellen Gene core und E1). In diesem Forschungsvorhaben sollen die Testcharakteristika von verschiedenen HCV-Genotypsisierungstests verglichen werden: der derzeit in der Routinediagnostik eingesetzte und auf Sequenzierung basierende TRUGENE® HCV 5’NC Genotyping Kit,  der ebenfalls kommerziell erhältliche reverse Hybridisierungs-assay VERSANT® 2.0 HCV genotyping assay und ein neu entwickelter Test basierend auf Sequenzierung der phylogenetisch informativen HCV NS5B Region.
Weitere Forschungsvorhaben befassen sich mit der Monitorisierung des HCV RNA-Spiegels in PatientInnen mit chronischer Hepatitis C unter antiviraler Therapie (Korrelation von Kurvenverläufen und therapeutischem Ansprechen), mit der Persistenz von HCV RNA in PBMCs und mit dem Nachweis bekannter und potenzieller Mutationen im HBV-Genom, die eine Medikamentenresistenz verursachen können.

Schlüsselpublikationen

Donnerer J,  Grahovac M, Stelzl E, Kessler HH, Bankuti C, Stadlbauer V, Stauber RE: Ribavirin levels and hemoglobin decline in early virological responders and non-responders to hepatitis C virus combination therapy. Pharmacology, 76, 136-140 (2006).

Kessler HH: Comparison of currently available assays for detection of hepatitis B virus DNA in the routine diagnostic laboratory. Expert Review of Molecular Diagnostics, 5, 531-536 (2005).
Kessler HH, Stelzl E, Haushofer AC: Lamivudine resistance-associated gene mutations. In: Fuchs J, Podda M (eds.): Encyclopedia of medical genomics and proteomics. Taylor & Francis Group, LLC, New York NY, 700-702 (2004), ISBN 0-8247-5502-2 (paper), ISBN 0-8247-5501-4 (electronic).

Stelzl E, Mueller Z, Marth E, Kessler HH: Rapid quantification of HBV DNA by automated sample preparation and real-time PCR. Journal of Clinical Microbiology, 42, 2445-2449 (2004).
Haushofer AC, Hauer R, Brunner H, Köller U, Trubert-Exinger D, Halbmayer WM, Koidl C, Kessler HH: No evidence of hepatitis B virus activity in patients with anti-HBc antibody positivity with or without anti-hepatitis C virus antibody positivity. Journal of Clinical Virology, 29, 221-223 (2004).

Haushofer AC, Berg J, Hauer R, Trubert-Exinger D, Stekel HG, Kessler HH: Genotyping of hepatitis C virus - comparison of three assays. Journal of Clinical Virology, 27, 276-285 (2003).

Kessler HH, Stelzl E, Marth E, Stauber RE: Detection of mutations in the hepatitis B virus polymerase gene. Clinical Chemistry, 49, 989-992 (2003).

Mueller Z, Deak J, Ross RS, Nagy E, Kovacs L, Roggendorf M, Kessler HH: Hepatitis C virus genotypes in Hungarian and Austrian patients with chronic hepatitis C. Journal of Clinical Virology, 26, 295-300 (2003).

Kessler HH, Clarici AMK, Stelzl E, Mühlbauer G, Daghofer E, Santner BI, Marth E, Stauber RE: Fully automated detection of hepatitis C virus RNA in serum and whole blood samples. Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology, 9, 1385-1388 (2002).

Stelzl E, Kormann-Klement A, Haas J, Daghofer E, Santner BI, Marth E, Kessler HH: Evaluation of an automated sample preparation protocol for quantitative detection of hepatitis C virus RNA. Journal of Clinical Microbiology, 40, 1447-1450 (2002).

Kooperationen

Department of Pathology, University of Rijeka, Kroatien (WTZ 11/2006)
Institut für Medizinische Virologie, JWG-Universität Frankfurt/Main, Deutschland
Institut für Virologie der Universität zu Köln, Deutschland
Institute of Microbiology and Immunology, University of Ljubljana, Slovenia
Labor für Molekularbiologie, Viollier AG, Basel, Schweiz
Regional Public Health Center, Szekesferhervar, Hungary
University Hospital for Infectious Diseases, Zagreb, Croatia (WTZ 07/2004)